您好,欢迎访问上海百研生物科技有限公司
销售服务热线
诚信为本,品质服务优先
24小时服务热线:021-60345824
13817049915
您的当前位置:
新闻动态
超滤离心管是否可重复使用、超滤管是否要预处理及分子量选择
来源: | 作者:baiyanbio | 发布时间: 2013-03-08 | 236 次浏览 | 分享到:

离心超滤管分子量选择:

按照样品量和目标分子量选择适当的离心超滤管,为了得到最高的收率,所选滤膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大小的1/3左右,不超过目标分子量的一半。因为超滤膜上孔径是平均孔径,膜上的孔并非均匀,离心高压下也可能渗漏,因此截留孔径越小,流速越慢但截留比例更大。如果样本浓度低体积大,可选择较小容积的离心超滤管多次重复加样离心。如果同时需要脱盐和去除可溶小分子杂质,可将待浓缩样品稀释到离心超滤管最大容积再离心,重复2次可除去99%盐。避免过长时间或者过速离心,虽然高品质的产品都有防死端设计,可避免过度离心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免过度浓缩,最终体积越小,越容易因表面吸附而损失得率。离心后用Tips轻轻吹吸几次滤膜截留的溶液,必要时补加一定体积的缓冲液冲洗膜表面,有助于减少膜表面吸附,能提高回收率。尽量避免Tips接触膜表面。

离心超滤管是否要预处理:

离心超滤管通常不需要预处理即可使用(也有人说用蒸馏水洗一次会好些),不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附最小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用最高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。常用的钝化溶液可选择:
11%牛血清白蛋白磷酸缓冲液溶液
25%十二烷基磺酸钠蒸馏水水溶液
35Tween-20非离子活性剂蒸馏水溶液
45Triton-X 蒸馏水溶液
55%聚乙二醇化合物蒸馏水溶液
61%免疫球蛋白IgG磷酸缓冲液溶液

离心超滤管因为需要高速离心,某些对剪切力或压力诱导下易变性的不稳定样品可能不太适合。另外超滤膜上孔径是平均孔径,膜容易堵,对于有微小颗粒或者碎片的样品,最好能先用较大孔径的离心超滤管过滤一次,再进行下一步浓缩。

离心超滤管是否可以重复使用:

离心超滤管通常不能消毒一次性使用。由于单管价格并不便宜,不少人尝试重复使用----经验是用蒸馏水清洗膜表面多次,离心一次到两次,那种可以反向离心的小管子可以加蒸馏水浸泡后反向多离心一次,会好些。可重复用于同一样品,不用时可用蒸馏水浸泡,但是要防止细菌污染。不同样品就不要混用了。有人说泡在20%酒精、1NNaOH(氢氧化钠)中,防止长菌,而且防干,只要超滤膜侵了水,就不可以再让它干,但也有人说会破坏膜结构。反正厂家一般不支持重复用。多次重复使用会堵塞滤膜上的孔径,甚至出现漏液现象,影响实验结果。